目镜的作用如同普通放大镜。它接收物镜生成的倒立放大实像，并进行二次放大。为了让物镜成的实像位于目镜的焦距以内以便被放大，目镜的焦距必须大于物镜的焦距，这是显微镜光路设计的重要原则。
光学显微镜的成像原理是什么？
经过物镜和目镜的两次放大，微小物体得以被肉眼清晰看见。在此过程中，物镜的焦点与目镜的焦点需要重合，且物距不可过大。这种两级放大机制是显微镜能够揭示微观世界细节的核心原理。
光学显微镜主要由两组透镜组成，分别位于镜筒的两端。靠近眼睛的称为目镜，靠近被观察物体的称为物镜。这两组透镜在功能上均相当于凸透镜，通过协同工作来实现对微小物体的放大观察。
光线首先经过物镜成像。为了获得清晰的图像，物距必须控制在一倍焦距与两倍焦距之间。在这种条件下，物镜会形成一个倒立、放大的实像，且该实像的位置位于物镜的两倍焦距之外，这是成像的关键第一步。